Trizol使用說明書

一、分離純化的基本原理
研究基因的表達(dá)和調(diào)控時(shí)常常要從組織和細(xì)胞中分離和純化RNA。RNA質(zhì)量的高低常常影響cDNA庫，RT-PCR和Northern Blot等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的成敗。Trizol是一種新型總RNA抽提試劑，內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì)，能迅速破碎細(xì)胞，抑制細(xì)胞釋放出的核酸酶。
二、用戶需自備的試劑和材料
無水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要）、 1.5ml Eppendorf管（RNase-free）、 Tips（RNase-free）

三、準(zhǔn)備工作
RNase酶非常穩(wěn)定，是導(dǎo)致RNA降解最主要的物質(zhì)。它在一些極端的條件可以暫時(shí)失活，但限制因素去除后有迅速復(fù)性。用常規(guī)的高溫高壓蒸氣滅菌方法和蛋白抑制劑都不能是RNase完全失活。它廣泛存在于人的皮膚上，因此，在與RNA制備有關(guān)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)時(shí)，必須戴手套。
RNase的又一污染源是取液器，根據(jù)取液器制造商的要求對取液器進(jìn)行處理。一般情況下采用用DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的內(nèi)部和外部，基本達(dá)到要求。取RNase-free的物品時(shí)必須戴手套。
1、 料制品的處理 盡可能使用無菌，一次性塑料制品，已標(biāo)明RNase-Free 的塑料制品，如沒有開封使用過通常沒有必要再次處理。對于國產(chǎn)塑料制品，原則上都必須處理方可使用。處理步驟如下：
1）在玻璃燒杯中注入去離子水，加入DEPC使DEPC的終濃度為0.1%。注意：DEPC為劇毒物，活性很強(qiáng)，小心在通風(fēng)柜中使用。