點(diǎn)成方案丨點(diǎn)成生物PCR實(shí)驗(yàn)解決方案

PCR概述

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction, PCR)是一種在體外模擬DNA復(fù)制過(guò)程，擴(kuò)增少量的DNA片段，從而獲得足夠數(shù)量的DNA樣本用于進(jìn)一步研究的常見(jiàn)的分子生物學(xué)技術(shù)。該技術(shù)由美國(guó)的Kary Mullis在1983年發(fā)明，由于高度特異性和靈敏度，PCR被廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究、疾病診斷、農(nóng)業(yè)檢測(cè)和法醫(yī)鑒定等領(lǐng)域，而Kary Mullis也因這一發(fā)明獲得了1993年的諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。

PCR技術(shù)主要包含3個(gè)反應(yīng)步驟

01 變性

模板DNA在高溫下（通常為93~94℃）變性，原來(lái)的DNA雙鏈解離成單鏈；

02 退火

反應(yīng)體系的溫度降至50-65℃時(shí)，引物與單鏈互補(bǔ)結(jié)合；

03 延伸

在耐熱的DNA聚合酶作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，合成新鏈；

PCR技術(shù)原理示意圖

PCR分類

隨著PCR技術(shù)的不斷發(fā)展，在PCR技術(shù)原理的基礎(chǔ)上衍生出了多樣的PCR技術(shù)，目前常用的PCR技術(shù)主要包括以下幾類：

常規(guī)PCR

最原始和簡(jiǎn)單的PCR方法，在PCR反應(yīng)結(jié)束之后，通過(guò)凝膠電泳等方式分析PCR擴(kuò)增終產(chǎn)物，此方法無(wú)法監(jiān)測(cè)反應(yīng)過(guò)程，只能在反應(yīng)結(jié)束后借助電泳得到結(jié)果；

逆轉(zhuǎn)錄PCR

又稱RT-PCR，這是一種從mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA并擴(kuò)增的技術(shù)。要進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄PCR，需要先提取總RNA，以mRNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成cDNA，再以此cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)靈敏且應(yīng)用廣泛，可用于檢測(cè)細(xì)胞中基因表達(dá)水平，細(xì)胞中RNA病毒含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。

RT-PCR技術(shù)原理示意圖

實(shí)時(shí)熒光定量PCR

又稱qPCR或者Real-Time PCR，是指在PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中加入熒光染料或熒光基團(tuán)，通過(guò)收集熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線和Ct值對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行定量分析。qPCR常用的方法包括熒光染料法和熒光探針?lè)ā?/p>

qPCR的熒光染料法和熒光探針?lè)ㄔ硎疽鈭D

PCR常見(jiàn)問(wèn)題

在進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，可能會(huì)遇見(jiàn)以下常見(jiàn)問(wèn)題：

點(diǎn)成生物PCR試驗(yàn)解決方法

作為全國(guó)知名的實(shí)驗(yàn)室儀器集成商，點(diǎn)成生物始終致力于為客戶提供先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備解決方案。為幫助客戶在PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程中保持潔凈的操作環(huán)境，點(diǎn)成生物提供了一系列性能卓越的優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。如果您對(duì)點(diǎn)成生物的PCR實(shí)驗(yàn)解決方案感興趣，歡迎您隨時(shí)與我們聯(lián)系。

潔凈的操作環(huán)境

UVC/T-M-AR超凈工作臺(tái)

UVR-Mi空氣凈化器

充分的樣品準(zhǔn)備

點(diǎn)成生物C系列移液器

DC-MIX-V4500VT 迷你渦旋混勻器

高效的實(shí)驗(yàn)進(jìn)程

MyGo系列實(shí)時(shí)定量PCR儀

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CVP-2 PCR離心/渦旋混合一體機(jī)

DC-CNT-R44高速冷凍離心機(jī)

【關(guān)于點(diǎn)成】

點(diǎn)成生物與多家先進(jìn)的國(guó)際儀器制造商（Grant、Nuve、Cellix、Microfluidic ChipShop、Beonchip、Drucker等）進(jìn)行深度合作，專注于生命科學(xué)、溫度控制、臨床應(yīng)用、微流控等領(lǐng)域；提供的產(chǎn)品有水浴、搖床、混勻器、離心機(jī)、移液槍、恒溫振蕩器、培養(yǎng)箱、蒸餾水機(jī)、程序降溫儀、微流控芯片及分析系統(tǒng)等常用實(shí)驗(yàn)儀器；致力于生物科技領(lǐng)域產(chǎn)品和解決方案。

審核編輯黃宇