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淺析基于微流控芯片的異質(zhì)性細(xì)胞外囊泡精準(zhǔn)分離和定量方法

微流控 ? 來源:微流控 ? 2023-01-17 14:37 ? 次閱讀

癌癥的篩查、早期診斷、預(yù)后監(jiān)測等一直是科學(xué)難題。最常見的癌癥診斷方法主要是基于組織活檢,這種侵入性方法非常耗時(shí),并且在某些患者中存在潛在風(fēng)險(xiǎn),因此不適合用于監(jiān)測腫瘤的發(fā)展過程。

此外,組織活檢會(huì)增加癌癥轉(zhuǎn)移的可能性,并且部分腫瘤并不總是易于活檢取樣。

因此,監(jiān)測癌癥的持續(xù)發(fā)展,需要利用具有高靈敏度、特異性且低成本的“液體活檢”技術(shù)來解決。

液體活檢作為一種非侵入式的血液檢測技術(shù),能監(jiān)測腫瘤或者轉(zhuǎn)移灶釋放到血液的循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)、細(xì)胞外囊泡(EV)和蛋白標(biāo)志物,是檢測腫瘤和癌癥輔助治療的突破性技術(shù)。

與傳統(tǒng)的組織活檢相比,液體活檢以速度快、樣本易獲取,損傷小等特點(diǎn)成為了一種新興的癌癥診斷方法,近年來備受關(guān)注。

中山大學(xué)藥學(xué)院張?jiān)獞c教授團(tuán)隊(duì)長期開發(fā)各類微流控芯片進(jìn)行液體活檢的研究,主要針對(duì)循環(huán)腫瘤細(xì)胞和外泌體等生物標(biāo)志物的檢測,通過引入一系列的DNA納米技術(shù)信號(hào)放大策略實(shí)現(xiàn)高靈敏的靶標(biāo)檢測。

許多研究表明,腫瘤來源細(xì)胞外囊泡(tEVs)生物標(biāo)志物可以反映癌細(xì)胞的表型,在癌癥的診斷和治療中具有很大的潛力。

然而,tEVs表現(xiàn)出高度的異質(zhì)性,由于其低表達(dá),快速、敏感地識(shí)別tEVs生物標(biāo)志物仍然具有挑戰(zhàn)性。

熒光光譜的重疊也顯著限制了熒光探針對(duì)tEVs生物標(biāo)志物的多重分析。

因此,開發(fā)一種高靈敏多表型tEVs的分析方法可以提高疾病診斷的準(zhǔn)確率和實(shí)時(shí)監(jiān)測疾病的進(jìn)展,從而為患者制定精準(zhǔn)治療的方案,以達(dá)到最佳的臨床效果。

目前用于tEVs分析的方法大多還側(cè)重于單個(gè)生物標(biāo)志物的特異性識(shí)別,忽略了tEVs的異質(zhì)性,并可能遺漏有關(guān)疾病進(jìn)展的重要信息,導(dǎo)致其tEVs識(shí)別的準(zhǔn)確性不足。

此外tEVs的異質(zhì)性也會(huì)阻礙tEVs的識(shí)別和信號(hào)讀出。

近期,張?jiān)獞c教授課題組與中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院吳敏昊教授課題組以及美國杜蘭大學(xué)胡曄教授課題組合作,利用微流控芯片中不同尺寸間隙的微柵欄結(jié)構(gòu)對(duì)不同尺寸的微球進(jìn)行排布和分選的策略,開發(fā)了一種簡便靈活的多重tEVs表型分析方法,實(shí)現(xiàn)了高選擇性和敏感性的tEVs的原位捕獲,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)多個(gè)信號(hào)的同時(shí)讀出。

該方法使用特異性發(fā)夾探針編碼不同尺寸的微球,從而可以捕獲不同表型的tEVs。

此外,在芯片中設(shè)計(jì)了不同尺寸間隙的微柵欄結(jié)構(gòu)對(duì)微球進(jìn)行排布和分選,以生成特定位置的信號(hào),指示不同tEVs生物標(biāo)志物的水平。

同時(shí),進(jìn)一步利用原位滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)對(duì)這些微球上的tEVs生物標(biāo)志物信號(hào)進(jìn)行放大。

該策略允許通過熒光同時(shí)檢測多種tEVs表型,而不受光譜重疊的限制。

該研究表明,該方法能快速、高靈敏度地同時(shí)檢測6種不同的tEVs表型。

由于傳感平臺(tái)的可編程性,該方法可以快速適用于檢測不同tEVs表型的替代檢測生物標(biāo)志物。

值得注意的是,臨床研究表明,該策略可能為癌癥患者的精準(zhǔn)診斷和個(gè)性化治療提供新的思路。

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圖1 利用尺寸編碼的親和微球鑒定腫瘤來源的細(xì)胞外囊泡的表型

這項(xiàng)工作是基于該課題組幾個(gè)月前發(fā)表在Angew Chem Int Ed Engl.上的一個(gè)工作的延伸和發(fā)展。

該課題組先前提出了一種基于芯片中不同尺寸間隙的微柵欄結(jié)構(gòu)對(duì)微球進(jìn)行排布和分選的策略,該策略利用顏色和尺寸編碼的微球開發(fā)了一種簡便靈活的多重免疫分析方法,進(jìn)行新冠肺炎血清學(xué)抗體和炎癥標(biāo)志物的定量檢測(圖2)。通過將兩種不同顏色的量子點(diǎn)按不同比例導(dǎo)入到不同尺寸的聚苯乙烯微球中,構(gòu)建了基于顏色和尺寸雙重編碼的微球庫。

隨后在芯片中通過不同尺寸間隙的微柵欄結(jié)構(gòu)對(duì)微球進(jìn)行排布和分選,并利用滾環(huán)擴(kuò)增方法在微球的免疫復(fù)合物上偶聯(lián)有大量熒光分子的長DNA串聯(lián)體,進(jìn)而對(duì)靶標(biāo)分子進(jìn)行信號(hào)放大,達(dá)到比常規(guī)方法更低的檢測限。

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圖2 一種基于雙重編碼微球和滾環(huán)擴(kuò)增的多重分析方法用于新冠血清學(xué)評(píng)估






審核編輯:劉清

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原文標(biāo)題:基于微流控芯片的異質(zhì)性細(xì)胞外囊泡精準(zhǔn)分離和定量分析

文章出處:【微信號(hào):Micro-Fluidics,微信公眾號(hào):微流控】歡迎添加關(guān)注!文章轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處。

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